Fir-riċerka bijoloġika, normalment jintużaw polipeptidi b'sekwenza twila.Għal peptidi b'aktar minn 60 aċidu amminiku fis-sekwenza, l-espressjoni tal-ġeni u SDS-PAGE huma ġeneralment użati biex jinkisbu.Madankollu, dan il-metodu jieħu żmien twil u l-effett finali tas-separazzjoni tal-prodott mhuwiex tajjeb.
Sfidi u soluzzjonijiet għal sinteżi twila ta 'peptidi
Fis-sintesi ta 'peptidi twal, aħna dejjem iffaċċjaw problema, jiġifieri, it-tfixkil steriku tar-reazzjoni ta' kondensazzjoni jiżdied maż-żieda tas-sekwenza fis-sintesi, u l-ħin ta 'reazzjoni jeħtieġ li jiġi aġġustat biex ir-reazzjoni tkun kompluta.Madankollu, iktar ma jkun itwal il-ħin ta 'reazzjoni, aktar jiġu prodotti effetti sekondarji, u jiġi ffurmat porzjon tal-peptide fil-mira.Tali residwi - ktajjen defiċjenti tal-peptidi huma impuritajiet ewlenin prodotti f'sintesi twila tal-peptidi.Għalhekk, fis-sintesi ta 'peptide twil, il-problema ewlenija li rridu negħlbu hija li nesploraw il-kundizzjonijiet ta' reazzjoni ta 'kwalità għolja u l-metodi ta' reazzjoni, sabiex ir-reazzjoni ta 'kondensazzjoni ta' aċidu amminiku ssir aktar komprensiva u sħiħa.Barra minn hekk, tnaqqas il-ħin ta 'reazzjoni, minħabba li aktar ma jkun itwal il-ħin ta' reazzjoni, aktar reazzjonijiet sekondarji inkontrollabbli, iktar ikunu kumplessi l-prodotti sekondarji.Għalhekk, it-tliet punti li ġejjin huma miġbura fil-qosor:
Is-sintesi tal-microwave tista' tintuża: Għal xi aċidi amminiċi li jiltaqgħu magħhom fil-proċess ta 'sintesi li mhumiex faċli biex jiġu integrati, tista' tintuża s-sinteżi tal-microwave.Dan il-metodu għandu riżultati notevoli, u jnaqqas ħafna l-ħin ta 'reazzjoni, u jnaqqas il-formazzjoni ta' żewġ prodotti sekondarji ewlenin.
Jista 'jintuża metodu ta' sinteżi ta 'frammenti: Meta xi peptidi huma diffiċli biex jiġu sintetizzati b'metodi ta 'sintesi komuni u mhux faċli biex jiġu ppurifikati, nistgħu nadottaw il-kondensazzjoni sħiħa ta' diversi aċidi amminiċi f'ċertu segment tal-peptide għall-katina tal-peptidi kollha kemm hi.Dan il-metodu jista 'wkoll isolvi ħafna problemi fis-sintesi.
Tista 'tintuża sinteżi ta' Acylhydrazide: is-sinteżi ta 'acylhydrazide ta' peptidi hija metodu ta 'sinteżi ta' fażi solida ta 'peptide Cys N-terminal u reazzjoni selettiva kimika ta' polypeptide hydrazide C-terminal bejn il-formazzjoni ta 'bonds amide biex jinkiseb metodu ta' twaħħil tal-peptide.Ibbażat fuq il-pożizzjoni ta 'Cys fil-katina tal-peptidi, dan il-metodu jaqsam il-katina tal-peptidi kollha f'sekwenzi multipli u jissintetizzahom rispettivament.Fl-aħħarnett, il-peptide fil-mira jinkiseb permezz ta 'reazzjoni ta' kondensazzjoni tal-fażi likwida.Dan il-metodu mhux biss inaqqas ħafna l-ħin ta 'sintesi ta' peptide twil, iżda jżid ukoll b'mod sinifikanti l-purità tal-prodott finali.
Purifikazzjoni twila tal-peptidi
Il-partikolarità ta 'peptidi twal inevitabbilment twassal għal komponenti kumplessi ta' peptidi mhux raffinati.Għalhekk, hija wkoll sfida li jiġu purifikati peptidi twal bl-HPLC.Serje amilojde ta 'proċess ta' purifikazzjoni tal-polipeptidi, li jassorbu ħafna esperjenza u użata b'suċċess fil-purifikazzjoni ta 'peptide twil.Bl-adozzjoni ta 'tagħmir ġdid, taħlit ta' sistemi ta 'purifikazzjoni multipli, separazzjoni ripetuta u metodi ta' esperjenza oħra, ir-rata ta 'suċċess ta' purifikazzjoni twila ta 'peptidi tjiebet ħafna.
Ħin tal-post: Apr-18-2023