Trasferiment tal-enerġija tar-reżonanza tal-fluworexxenza (FRET)
It-trasferiment tal-enerġija tar-reżonanza tal-fluworexxenza (FRET) huwa proċess ta 'trasferiment tal-enerġija mhux radjattiv li fih l-enerġija tal-istat eċċitati tad-donatur tiġi trasferita għall-istat eċċitati tal-aċċettatur permezz tal-interazzjoni ta' koppji elettriċi intermolekulari.Dan il-proċess ma jinvolvix fotoni u għalhekk mhuwiex radjattiv.Dan l-assaġġ għandu l-vantaġġi li jkun veloċi, sensittiv u sempliċi.
Iż-żebgħa użata fl-assaġġ FRET tista' tkun identika.Iżda fil-biċċa l-kbira tal-applikazzjonijiet, żebgħa differenti huma attwalment użati.Fil-qosor, it-trasferiment ta 'enerġija ta' reżonanza luminuża huwa t-trasferiment ta 'par ta' dipoli mid-donatur (żebgħa 1) għall-aċċettatur (żebgħa 2) meta l-grupp donatur ikun eċċitat.B'mod ġenerali, l-ispettru tal-emissjoni tal-grupp tal-fluworofori tad-Donatur jikkoinċidi mal-ispettru tal-assorbiment tal-grupp tal-Accettor."Meta d-distanza bejn iż-żewġ fluworofori hija xierqa (10 — 100 A), it-trasferiment tal-enerġija tal-fluworofori mid-donatur għall-aċċettatur jista 'jiġi osservat."Il-metodu tat-trasferiment tal-enerġija jiddependi fuq l-istruttura kimika tar-riċettur:
1. Huwa kkonvertit f'vibrazzjoni molekulari, jiġifieri, id-dawl luminuż tat-trasferiment tal-enerġija jisparixxi.(Ir-riċettur huwa quencher tad-dawl)
2. L-emissjoni hija aktar intensa mir-riċettur innifsu, li jirriżulta fi redshift fl-ispettru tal-fluworexxenza sekondarja.”(Ir-riċetturi huma emittenti luminużi).
Il-grupp tad-donaturi (EDANS) u l-ġene li jaċċetta (DABCYL) huma marbuta b'mod uniformi mas-sottostrat naturali tal-protease tal-HIV, u meta s-sottostrat ma jkunx skonnettjat, DABCYL jista' jkeċċi EDANS u mbagħad isir ma jinstabx għall-fluworin.Mal-qtugħ tal-protease tal-HIV-1, EDANS ma jibqax mitfi minn DABCYL, u sussegwentement jistgħu jinstabu luciferases EDANS.Id-disponibbiltà ta' inibituri tal-protease tista' tiġi mmonitorjata b'bidliet fl-intensità tal-fluworexxenza ta' EDANS.
Il-peptidi FRET huma għodda konvenjenti biex tistudja n-nonspecificity tal-peptidase.Peress li l-proċess ta 'reazzjoni tiegħu jista' jiġi mmonitorjat kontinwament, jipprovdi metodu konvenjenti għall-iskoperta tal-attività tal-enzimi.It-tleqqija prodotta wara l-idroliżi tal-bonds tal-peptidi mid-donatur/aċċettatur jipprovdi kejl tal-attività tal-enżimi f'konċentrazzjonijiet nanomolari.Meta l-peptide FRET ikun intatt, juri għajbien f'daqqa tal-flash intern, iżda meta kwalunkwe rabta tal-peptide biswit id-donatur/aċċettatur tinkiser, tirrilaxxa flash, li tista 'tiġi skoperta kontinwament u l-attività tal-enzima tista' mbagħad tiġi kkwantifikata.
Ħin tal-post: Awissu-14-2023