Skema tad-disinn u soluzzjoni tal-katina tal-peptide tal-polypeptide

I. Sommarju
Il-peptidi huma makromolekuli speċjali b'tali mod li s-sekwenzi tagħhom huma mhux tas-soltu fil-karatteristiċi kimiċi u fiżiċi tagħhom.Xi peptidi huma diffiċli biex jiġu sintetizzati, filwaqt li oħrajn huma relattivament faċli biex jiġu sintetizzati iżda diffiċli biex jiġu purifikati.Il-problema prattika hija li l-biċċa l-kbira tal-peptidi huma kemmxejn solubbli f'soluzzjonijiet milwiema, għalhekk fil-purifikazzjoni tagħna, il-parti korrispondenti tal-peptide idrofobiku għandha tinħall f'solventi mhux milwiema, Għalhekk, dawn is-solventi jew buffers x'aktarx ikunu inkonsistenti ħafna mal-użu. ta 'proċeduri sperimentali bijoloġiċi, sabiex it-tekniċi huma strettament ipprojbiti milli jużaw il-peptide għall-iskopijiet tagħhom stess, sabiex dawn li ġejjin huma diversi aspetti tad-disinn ta' peptidi għar-riċerkaturi.

Skema tad-disinn u soluzzjoni tal-katina tal-peptide tal-polypeptide
It-tieni, l-għażla korretta ta 'peptidi sintetiċi diffiċli
1. Tul totali ta 'sekwenzi regolati 'l isfel
Peptidi ta 'inqas minn 15-il residwu huma aktar faċli biex jinkisbu minħabba li d-daqs tal-peptide jiżdied u l-purità tal-prodott mhux raffinat tonqos.Peress li t-tul totali tal-katina tal-peptidi jiżdied lil hinn minn 20 residwu, il-kwantità preċiża tal-prodott hija tħassib ewlieni.F'ħafna esperimenti, huwa faċli li tikseb effetti mhux mistennija billi tnaqqas in-numru tar-residwi taħt l-20.
2. Naqqas in-numru ta 'residwi idrofobiċi
Peptidi bi predominanza kbira ta 'residwi idrofobiċi, speċjalment fir-reġjun 7-12 residwi mill-C-terminal, normalment jikkawżaw diffikultajiet sintetiċi.Dan jitqies bħala kombinazzjoni inadegwata preċiżament minħabba li tinkiseb folja B-fold fis-sintesi."F'każijiet bħal dawn, jista 'jkun utli li tikkonverti aktar minn żewġ residwi pożittivi u negattivi, jew li jitqiegħed Gly jew Pro fil-peptide biex jinfetaħ il-kompożizzjoni tal-peptide."
3. Downregolazzjoni ta 'residwi "diffiċli".
"Hemm għadd ta 'residwi Cys, Met, Arg, u Try li ġeneralment mhumiex sintetizzati faċilment."Ser tipikament jintuża bħala alternattiva mhux ossidattiva għal Cys.
Skema tad-disinn u soluzzjoni tal-katina tal-peptide tal-polypeptide

It-tielet, ittejjeb l-għażla korretta ta 'solubbli fl-ilma
1. Aġġusta t-terminal N jew C
Relattivament għal peptidi aċidużi (jiġifieri, iċċarġjati b'mod negattiv f'pH 7), l-aċetilazzjoni (aċetilazzjoni N-terminal, terminali C dejjem iżżomm grupp carboxyl ħieles) hija partikolarment rakkomandata biex tiżdied il-ħlas negattiv.Madankollu, għal peptidi bażiċi (jiġifieri, iċċarġjati b'mod pożittiv f'pH 7), aminazzjoni (grupp amino ħieles fl-N-terminal u aminazzjoni fit-terminal C) hija partikolarment rakkomandata biex tiżdied il-ħlas pożittiv.

2. Tqassar jew ittawwal ħafna s-sekwenza

Xi wħud mis-sekwenzi fihom numru kbir ta 'aċidi amminiċi idrofobiċi, bħal Trp, Phe, Val, Ile, Leu, Met, Tyr u Ala, eċċ Meta dawn ir-residwi idrofobiċi jaqbżu l-50%, ġeneralment ma jkunux faċli biex jinħall.Jista 'jkun utli li tittawwal is-sekwenza biex tkompli żżid il-poli pożittivi u negattivi tal-peptide.It-tieni għażla hija li tirregola 'l isfel id-daqs tal-katina tal-peptidi biex iżżid il-poli pożittivi u negattivi billi tirregola r-residwi idrofobiċi.Aktar ma jkunu b'saħħithom in-naħat pożittivi u negattivi tal-katina tal-peptidi, iktar ikun probabbli li jirreaġixxi mal-ilma.
3. Poġġi f'residwu li jinħall fl-ilma
Għal xi ktajjen peptidi, il-kombinazzjoni ta 'xi aċidi amminiċi pożittivi u negattivi tista' ttejjeb is-solubilità fl-ilma.Il-kumpanija tagħna tirrakkomanda t-terminal N jew C-terminal ta 'peptidi aċidużi li għandhom jiġu kkombinati ma' Glu-Glu.It-terminal N jew C tal-peptide bażiku ngħata u mbagħad Lys-Lys.Jekk il-grupp iċċarġjat ma jistax jitqiegħed, Ser-Gly-Ser jista 'jitqiegħed ukoll fit-terminu N jew C.Madankollu, dan l-approċċ ma jaħdimx meta l-ġnub tal-katina tal-peptidi ma jistgħux jinbidlu.